指标信息: 分辨率:THR-Ser Ile-leu ≥98% 保留时间重现性:RSD≤0.5% (水解,所有峰) 峰面积重现性:RSD≤1% (水解,所有峰)
测定原理是利用样品各种氨基酸组分的结构不同、酸碱性、极性及分子大小不同,在阳离子交换柱上将它们分离,采用不同pH值离子浓度的缓冲液将各氨基酸组分依次洗脱下来,再逐个以另一流路的茚三酮试剂混合,然后共同流至螺旋反应管中,于一定温度下(通常为115~120℃)进行显色反应,形成在570nm有-大吸收的蓝紫色产物。其中的羟脯氨酸与茚三酮反应生成黄色产物,其-大吸收在440nm。
操作方法:
样品处理
测定样品中各种游离氨基酸含量,可以除去脂肪杂质后,直接上柱进行分析。
测定蛋白质的氨基酸组成时样品必须经酸水解,使蛋白质完全变成氨基酸后才上柱进行分析。
样品分析
经过处理后的样品上柱进行分析。上柱的样品量根据所用自动分析仪的灵敏度来确定。一般为每种氨基酸0.1μmol 左右(水解样品干重为0.3mg 左右)。测定必须在pH5~5.5、100℃下进行,反应进行时间为10~15min,生成的紫色物质在570nm 波长下进行比色测定。而生成的黄色化合物在440nm 波长下进行比色测定。做一个氨基酸全分析一般只需1h 左右,同时可将几十个样品一起装入仪器,自动按序分析,-后自动计算给出精确的数据。仪器精确度在±1~3%。用阳离子交换柱分离及测定氨基酸所的如图1
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